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制備型高效液相色譜儀的特點、原理和操作步驟

更新時間:2022-11-08      點擊次數(shù):4325
  制備型高效液相色譜儀的主要特點:
  色譜技術越來越廣泛的應用于制藥,化工和生物工程等領域中樣品的分離和純化。典型的應用如合成原料的純化,標準物質(zhì)的制備,產(chǎn)品的提純等方面。
  采用步進電機控制,輸液平穩(wěn),雙柱塞結(jié)構(gòu),脈動低,性能指標較高,輔以UV系列紫外-可見波長檢測器(配半制備/制備型檢測池)及手動/電動進樣閥及切換閥,即可滿足廣大用戶生產(chǎn)和研究的需要。
  制備型高效液相色譜儀的原理:
  儲液器中的流動相被高壓泵打入檢測系統(tǒng),樣品溶液經(jīng)進樣器進入流動相,被流動相載入色譜柱(固定相)內(nèi),由于樣本溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù),在兩相中作相對運動時,經(jīng)過反復多次的“吸附-解吸”的分配過程,各組分在移動速度上產(chǎn)生較大的差別,被分離成單個組分依次從柱內(nèi)流出,通過檢測器時,樣本濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄儀,數(shù)據(jù)以圖譜形式輸出檢測結(jié)果。
  制備型高效液相色譜儀操作步驟:
  1) 過濾流動相,根據(jù)需要選擇不同的濾膜(0.45um)。
  2) 對抽濾后的流動相進行超聲脫氣10-20分鐘。
  3) 打開HPLC工作站(包括計算機軟件和色譜儀),連接好流動相管道,連接檢測系統(tǒng)。4)進入HPLC控制界面主菜單,點擊manual,進入手動菜單。
  4) 有一段時間沒用,或者換了新的流動相,需要先沖洗泵和進樣閥。沖洗泵,直接在泵的出水口,用針頭抽取。沖洗進樣閥,需要在manual菜單下,先點擊purge,再點擊start,沖洗時速度不要超過10 ml/min。
  5) 調(diào)節(jié)流量,初次使用新的流動相,可以先試一下壓力,流速越大,壓力越大,一般不要超過2000。點擊injure,選用合適的流速,點擊on,走基線,觀察基線的情況。
  6) 設計走樣方法。點擊file,選取select users and methods,可以選取現(xiàn)有的各種走樣方法。若需建立一個新的方法,點擊new method。選取需要的配件,包括進樣閥,泵,檢測器等,根據(jù)需要而不同。選完后,點擊protocol。一個完整的走樣方法需要包括:a.進樣前的穩(wěn)流,一般2-5分鐘;b.基線歸零;c.進樣閥的loading-inject轉(zhuǎn)換;d.走樣時間,隨不同的樣品而不同。
  7) 進樣和進樣后操作。選定走樣方法,點擊start。進樣,所有的樣品均需過濾。方法走完后,點擊postrun,可記錄數(shù)據(jù)和做標記等。全部樣品走完后,再用上面的方法走一段基線,洗掉剩余物。
  8) 關機時,先關計算機,再關液相色譜。
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