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液相色譜柱使用維護與保養(yǎng)

更新時間:2016-01-19      點擊次數(shù):1905
液相色譜柱使用維護與保養(yǎng)
液相色譜柱使用前應仔細閱讀說明書,注意色譜柱的使用溫度、pH值范圍、所用緩沖鹽的種類等。
1、新色譜柱在使用前,先用純甲醇在254nm波長下處理,直至基線沖平為止,然后用甲醇:水=10:90(V:V)沖柱子,直到基線沖平為止。
2、一般反相色譜柱使用方法:先以甲醇:水=10:90(V:V)沖洗柱子45分鐘,再換上流動相平衡45分鐘,根據(jù)基線情況進樣(基線漂移不符合要求時應延長平衡時間),分析樣品完畢,流動相繼續(xù)20分鐘(或20分鐘又上),使用緩沖鹽(或含鹽)作流動相,應用不含緩沖鹽(作同量的水代替緩沖鹽)的流動相沖洗色譜柱,使色譜柱中的鹽*洗掉。再換上甲醇:水=10:90(V:V)沖洗柱子45~60分鐘,然后再用100%甲醇沖40分鐘,再放置保存。
注意:不能用純有機溶劑直接沖洗色譜柱,防止鹽析出,堵塞色譜柱或儀器管路,而使色譜柱報廢。
3、一般正相色譜柱使用方法:zui常用的流動相是水和乙腈混合物。先用乙腈:水=85:15(V:V)沖洗柱子45分鐘,再換上流動相平衡45分鐘,根據(jù)基線情況進樣(基線漂移嚴重應延長平衡時間),分析樣品完畢,流動相繼續(xù)20分鐘(或20分鐘以上),再換上乙腈:水=85:15(V:V)沖洗柱子45~60分鐘,放置保存。
4、特殊色譜柱(手性柱或異構體柱子)使用時,除仔細閱讀說明書外,還需向所購買單位詳細咨詢使用方法及注意事項,確認無誤后,方可使用。
5、在替換溶劑時,應確保系統(tǒng)和色譜柱中的溶劑與新溶劑互溶。如果兩種溶劑互溶性和物理性質(zhì)未知,可以把兩種溶劑倒在燒杯中觀察,以避免直接進入HPLC系統(tǒng)可能出現(xiàn)不互溶的問題。
6、對于反相柱,長期保存色譜柱時應將柱內(nèi)充滿乙腈或甲醇,柱接頭要擰緊,防止溶劑揮發(fā)干燥。禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)靜置過夜或更長時間。正相柱可以儲存于嚴格脫水后的純正已烷中,儲存的溫度按照說明書要求儲存。
7、柱子在裝卸、更換時,動作要輕,接頭擰緊要適度。必須防止較強的機械振動,以免柱床產(chǎn)生空隙。
8、避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內(nèi)的填充狀況;柱壓的突然升高或降低也會影響柱內(nèi)填料狀態(tài),因此在調(diào)節(jié)流速時應該緩慢進行。
9、應逐漸改變?nèi)軇┑慕M成,特別是反相色譜柱中,不應直接從有機溶劑改變?yōu)槿渴撬?,反之亦然?/div>
10、如使用柱溫控制裝置時,應注意在通入流動相后才能升溫。溫度波動會引起色譜峰漂移并產(chǎn)生多種影響。使用色譜柱時,保持柱溫恒定非常重要。填料粒度不同也是選擇和考慮色譜柱使用溫度的因素之一。粒徑小于5μm的填料在溫度升高時柱床更容易塌陷,使柱效下降。如果運用得當,柱溫也是改善色譜分離的一個有效辦法,降溫可以增加保留時間、提高選擇性和分離度等,升溫則相反。
11、一般色譜柱不能反沖,只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時,才可以反沖。
12、色譜柱使用過程中,如果壓力升高,一種可能是燒結濾片被堵塞,這時應更換濾片或?qū)⑵淙〕鲞M行清洗;另一種可能是大分子進入柱內(nèi),使柱頭被污染;如果柱效降低或色譜峰變形,則可能柱頭出現(xiàn)塌陷,死體積增大。
 
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