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制備型液相色譜儀樣品的前處理事項

更新時間:2017-10-09      點擊次數(shù):2536
  制備型液相色譜儀樣品的前處理事項
  
  制備型液相色譜儀安全注意事項
  
  1、流動相的物化性質(zhì)要與使用的檢測器相適應(yīng)。如使用UV檢測器,使用對紫外吸收較低的溶劑配制。
  
  2、在流動相配制好后,一定要進(jìn)行脫氣,除去溶解在流動相中的微量氣體既有利于檢測,還可以防止流動相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。水相流動相需經(jīng)常更換(一般不超過2天),防止長菌變質(zhì)。
  
  3、如果使用極性或離子性的緩沖溶液作流動相,應(yīng)在實驗完畢柱子沖洗干凈,并保存于甲醇/乙腈中。
  
  制備型液相色譜儀樣品的前處理:
  
  制備型液相色譜儀色譜柱分離的樣品多,比分析型液相色譜柱更容易受污染,樣品前處理非常必要。
  
  三氟乙酸(TFA)在緩沖液中的作用:
  
  1、TFA起到類似離子對的作用,一般濃度在0.05%~0.1%。濃度過高會使溶液偏酸,長時間使用可能影響色譜柱壽命。
  
  2、TFA可抑制硅膠表面的硅醇基,改善堿性化合物的峰形。若0.1%TFA分離不好,可加大濃度到0.2%,但用完后要及時沖洗色譜柱。
  
  3、走梯度時走成基線漂移,但對制備影響不大。
  
  制備型液相色譜儀降低柱壓的方法:
  
  采用1%乙酸水溶液和甲醇二元梯度。
  
  制備型液相色譜儀提高檢測下限的方法:
  
  1、如果是等度洗脫,一定要改成單元等度。
  
  2、盡量采用乙腈-水系統(tǒng)洗脫。乙腈紫外吸收小,相同條件下噪音小。
  
  制備型液相色譜儀用水要求:
  
  不含金屬離子和細(xì)菌。
  
  制備型液相色譜儀分析方法開發(fā)中流動相的調(diào)整原則:
  
  1、由強到弱:
  
  一般先用90%的乙腈或甲醇-水或緩沖溶液進(jìn)行試驗,可很快得到分離結(jié)果,然后根據(jù)出峰情況調(diào)整有機溶劑(乙腈或甲醇)的比例。
  
  2、三倍規(guī)則:
  
  每減少10%的有機溶劑(乙腈或甲醇)的量,保留因子增加約3倍,此為三倍規(guī)則。調(diào)整時注意觀察各個峰的分離情況。
  
  3、粗調(diào)轉(zhuǎn)微調(diào):
  
  當(dāng)分離達(dá)到一定程度時,應(yīng)將有機溶劑(乙腈或甲醇)10%的改變量調(diào)整為5%,并據(jù)此規(guī)則逐漸降低調(diào)整率,直至各組分的分離情況不再改變。
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